BCA蛋白濃度測定試劑盒是基于廣泛采用的BCA法開發(fā)的，為簡便、穩(wěn)定、敏感且兼容性強的蛋白濃度檢測提供解決方案。該試劑盒具有高靈敏度，可檢測濃度至25μg/ml，最小檢測量為0.5μg，樣品需1?20μl。

BCA法測定不受絕大部分化學物質干擾，可兼容高達5%的SDS、Triton X-100、Tween 20、60、80。然而，試劑盒對螯合劑和高濃度還原劑敏感，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，DTT低于1mM，β?Mercaptoethanol低于0.01%。這些特性確保了準確測定蛋白濃度，并提供可靠的實驗結果。

操作使用：

1.蛋白標準品的準備

a.取1.2ml蛋白標準配制液加入到一管蛋白標準(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標準溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。

b.取適量25mg/ml蛋白標準，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白標準，加入980µl稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標準可以-20℃長期保存。

2.BCA工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5mlBCA試劑A加100μl BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內穩(wěn)定。

3.蛋白濃度測定

a.將標準品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20μl，相當于標準品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b.加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標準品稀釋液補足到20μl。請注意記錄樣品體積。

c.各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當延長孵育時間。

d.用酶標儀測定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e.根據(jù)標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

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